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2017年第3期    高盐促大鼠血管平滑肌细胞增殖的时效量效关系及相关机制

刘娟1,商黔惠1,2,赵宇1,王晓春1

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  • 注:所有内容请以纸质版为准。
  • 【摘要】  

    目的 比较不同Na+浓度及其作用时间促大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖的差异,探讨高盐诱导VSMC增殖的可能机制。方法 组织贴壁法培养原代VSMC,传至第四代去血清同步化1 d,分别用139、141、144、147、150、153、156、159、162和165 mmol/L的Na+干预1、2、3和4 d后,MTT比色法和细胞增殖检测试剂盒(CCK-8)检测VSMC增殖情况。选取促增殖最显著的盐浓度和作用时间,以Na+ 139 mmol/L为对照进行后续实验。CCK-8法检测渗透压对VSMC增殖的影响;流式细胞仪分析VSMC增殖周期;免疫荧光染色和Western blot检测VSMC增殖细胞核抗原(PCNA)、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、血管紧张素Ⅱ 1型受体(AT1R) 的表达情况;实时荧光定量PCR检测VSMC中血管紧张素原(AGT)、AT1R mRNA的表达。结果 MTT和CCK-8结果显示,Na+ 153~165 mmol/L作用2、3 d可促进VSMC增殖(Na+ 159 mmol/L作用3 d最明显);CCK-8检测渗透压对VSMC增殖结果显示,与Na+ 139 mmol/L组比较,Na+ 159 mmol/L细胞明显增殖[(1.21±0.16)%比(1.00±0.25)%,P<0.05],而甘露醇组与Na+ 139 mmol/L组比较差异无统计学意义;流式细胞仪分析VSMC增殖周期结果显示,Na+ 159 mmol/L组G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增多(均P<0.05);PCNA免疫荧光染色可见Na+159 mmol/L组VSMC中PCNA阳性细胞核增加,Western blot结果显示Na+ 159 mmol/L组PCNA蛋白表达明显增加(均P<0.05);实时荧光定量PCR显示,与Na+ 139 mmol/L组相比,Na+ 159 mmol/L组中AGT、AT1R mRNA表达增加(均P<0.05);Western blot显示,与Na+ 139 mmol/L组相比,Na+ 159 mmol/L组中AngⅡ、AT1R蛋白表达增多(均P<0.05)。结论 高Na+(153~165 mmol/L)作用2~3 d能诱导VSMC增殖,且Na+ 159 mmol/L作用3 d增殖效应最为显著;作用机制可能与高Na+促进AngⅡ和AT1R表达有关。

  • 【正文快照】 高盐促大鼠血管平滑肌细胞增殖的时效量效关系及相关机制 中国高血压杂志, 2017,V32(3): 264-271 , 2017,V32(3): 264-271
  • 【分类号】37483
  • 【基金项目】国家自然科学基金资助项目(81160041、81460077);贵州省优秀科技教育人才省长专项基金项目[黔省专合字(2012)15号];贵州省国际科技合作计划[G字(2012)7038号];贵州省卫计委资助项目(gzwjkj 2014-1-071)